CENP-F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402178

Übersicht

CENPF kodiert CENP‑F, ein großes, mit dem Kinetochor assoziiertes Protein, das sich in der späten G2‑Phase und während der Mitose anreichert und die Chromosomenausrichtung, die Signalübertragung des Spindelkontrollpunkts sowie die korrekte Segregation während der Zellteilung koordiniert. CENP‑F trägt zur Mikrotubuli-Anheftung an den Kinetochoren bei und unterstützt die Zentrosomenfunktion und Spindeldynamik, wodurch es mit zentralen Wegen der mitotischen Progression und der Genomstabilität verknüpft ist. Eine Fehlregulation der CENPF-Expression oder -Lokalisierung steht in Zusammenhang mit chromosomaler Instabilität und veränderter Proliferationsfähigkeit – Merkmale, die in der Krebsbiologie häufig untersucht werden. CENP‑F dient zudem als Marker für den Zellzykluszustand und wird hinsichtlich seiner Rollen in der Kernarchitektur und in mitotischen Stressantworten in menschlichen Zellen erforscht.

Das CENP-F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CENPF-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CENPF-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CENPF nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CENP-F-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CENPF-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CENP-F-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CENPF-Exone abzielen, die für die CENP-F-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CENPF-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CENP-F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CENP-F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CENPF-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CENP-F HDR-Plasmid (h) und CENP-F HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CENPF-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CENPF-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.