Plásmido Doble Nickase (h) CENP-A: sc-402359-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CENP-A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CENP-A (h) y el plásmido de doble nickasa CENP-A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CENPA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CENP-A | sc-402359-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CENP-A | sc-402359-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CENPA codifica CENP‑A, una variante de la histona H3 que sustituye a la H3 canónica en los nucleosomas centroméricos para establecer y mantener la identidad del centrómero. Al reclutar componentes de la red constitutiva asociada al centrómero y permitir el ensamblaje del cinetocoro, CENP‑A favorece la segregación cromosómica precisa, la señalización del punto de control del huso y la estabilidad del genoma durante la mitosis. Su depósito se coordina con la remodelación de la cromatina y con vías de mantenimiento del centrómero reguladas por el ciclo celular, vinculando la arquitectura de la cromatina centromérica con el control proliferativo. La expresión desregulada o la localización errónea de CENP‑A se asocia con inestabilidad cromosómica y fenotipos de aneuploidía observados en múltiples contextos de cáncer y en otros trastornos del mantenimiento del genoma.
CENP-A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CENPA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CENPA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CENPA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CENPA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.