CENP-A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402359

Descripción general

CENPA codifica CENP-A, una variante de la histona H3 que reemplaza a la H3 canónica en los centrómeros para establecer la cromatina centromérica y definir la identidad del cinetocoro. La deposición y el mantenimiento de CENP-A están coordinados con las vías de ensamblaje del centrómero y con la progresión del ciclo celular mitótico, lo que favorece la correcta alineación y segregación de los cromosomas. La alteración de los niveles de CENP-A o de su localización en el centrómero desestabiliza la función del cinetocoro, promueve la inestabilidad cromosómica y la aneuploidía, y se estudia con frecuencia en el contexto de defectos en el mantenimiento del genoma observados en numerosos modelos de cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CENP-A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CENPA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CENPA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CENPA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CENP-A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CENPA para la investigación de la señalización de CENP-A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CENPA críticos para la función de CENP-A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CENPA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CENP-A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CENP-A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CENPA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CENP-A (h) y el plásmido HDR CENP-A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CENPA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CENPA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.