Cdk7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400665-ACT

O CDK7 humano codifica a quinase dependente de ciclina 7 (Cdk7), uma enzima de dupla função que atua como a quinase ativadora de CDKs no complexo CDK7–ciclina H–MAT1 e como componente central do fator geral de transcrição TFIIH. Ao fosforilar o domínio C-terminal da RNA polimerase II e ativar CDKs do ciclo celular, a Cdk7 coordena a iniciação da transcrição, a liberação da pausa proximal ao promotor e a progressão ordenada do ciclo celular. A atividade de CDK7 é rigidamente integrada à sinalização da resposta a danos no DNA e ao reparo por excisão de nucleotídeos acoplado à transcrição, conectando a manutenção do genoma às decisões de destino celular. A desregulação de programas transcricionais dependentes de CDK7 e do controle do ciclo celular é frequentemente estudada no contexto de estados proliferativos e de redes transcricionais oncogênicas, tornando o CDK7 um nó de alto valor para a investigação mecanística de vias.

Cdk7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDK7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdk7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDK7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDK7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdk7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDK7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdk7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdk7 em células tumorais com expressão de CDK7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.