Particules Lentivirales d'Activation (h) Cdc42EP4: sc-408523-LAC

CDC42EP4 code pour Cdc42EP4, une protéine effectrice de Cdc42 de la famille Borg/CEP, qui fait le lien entre la signalisation des GTPases Rho et le remodelage du cytosquelette d’actine et de septines. En coordonnant l’organisation des filaments et des structures contractiles, Cdc42EP4 contribue au contrôle de la forme cellulaire, à l’adhérence, à la polarité et aux programmes de migration, au cœur de la morphogenèse tissulaire et de la mécanobiologie cellulaire. Les dérégulations des sorties de la voie CDC42 et la réorganisation du cytosquelette sont fréquemment impliquées dans des comportements invasifs, des interactions stromales altérées et d’autres phénotypes pertinents pour la recherche sur le cancer et les maladies inflammatoires. En tant que nœud de lecture en aval de Cdc42, Cdc42EP4 constitue un levier accessible pour étudier l’architecture du cytosquelette et les modifications de la motilité dépendantes des signaux.

Les particules d'activation lentivirales Cdc42EP4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CDC42EP4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Cdc42EP4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CDC42EP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Cdc42EP4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CDC42EP4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.