Cdc20 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400583-ACT

Das humane Gen **CDC20** kodiert **Cdc20**, einen essenziellen Koaktivator des Anaphase-Promoting Complex/Cyclosome (**APC/C**), der den Übergang von der Metaphase zur Anaphase steuert, indem er den ubiquitinvermittelten Abbau wichtiger mitotischer Regulatoren, darunter **Securin** und **Cyclin B**, fördert. Cdc20 integriert Signale des Spindelassemblierungs-Checkpoints durch Interaktionen mit **MAD2**, **BUBR1** und **BUB3**, um eine korrekte Chromosomensegregation sicherzustellen und die genomische Stabilität zu erhalten. Eine dysregulierte **CDC20**-Expression oder das Umgehen des Checkpoints kann zu chromosomaler Instabilität und abweichender Proliferation beitragen, weshalb CDC20 häufig als zentraler Knotenpunkt in Signalwegen der Zellzykluskontrolle und mitotischen Genauigkeit untersucht wird. Studien mit Fokus auf CDC20 werden breit eingesetzt, um die Dynamik des APC/C, die Proteostase während der Mitose und Mechanismen zu analysieren, die mitotische Fehler mit Phänotypen der Genominstabilität verknüpfen.

Cdc20 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDC20-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cdc20 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDC20-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDC20-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cdc20-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDC20-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cdc20-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cdc20-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDC20-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.