Plasmide Double Nickase (m) CD88: sc-419395-NIC

C5ar1 code CD88, le récepteur canonique couplé aux protéines G pour l’anaphylatoxine du complément C5a, reliant l’activation du complément à la chimiotaxie des leucocytes, à la dégranulation, au burst oxydatif et à la production de cytokines. La signalisation via CD88 mobilise des voies telles que PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLCβ–flux de Ca²⁺ et NF-κB, modulant ainsi l’activation de l’immunité innée et le trafic des cellules inflammatoires. Dans des modèles murins, l’activité de C5ar1 est fréquemment étudiée dans des contextes d’infection, d’inflammation stérile, d’auto-immunité, de neuroinflammation et de lésions tissulaires, où les réponses induites par le complément influencent des phénotypes associés à la maladie. Comme CD88 est exprimé dans diverses populations myéloïdes ainsi que dans certaines cellules non hématopoïétiques, il constitue un nœud central pour disséquer le dialogue complément–système immunitaire au sein de microenvironnements complexes.

CD88 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus C5ar1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de C5ar1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de C5ar1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de C5ar1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.