CD63 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400061-NIC

CD63（テトラスパニン30）は広く発現するテトラスパニンで、後期エンドソーム、リソソーム、エクソソームに高濃度に存在し、膜タンパク質の輸送やシグナル伝達を協調させる「テトラスパニン富化マイクロドメイン」の形成・組織化を助けます。インテグリンや免疫受容体と相互作用することで、CD63はエンドソーム成熟、小胞のドッキングと融合、抗原処理、ならびに細胞接着に関連する経路を制御します。CD63は細胞外小胞のマーカーとして一般的に用いられ、免疫調節、ウイルスの侵入／出芽、分泌顆粒におけるプロテアーゼ活性の制御などの過程にも関与するとされています。CD63の発現量や局在の変化は、炎症応答やがん細胞の浸潤・転移表現型と関連づけられており、膜動態や細胞間コミュニケーションにおける役割を解明するための機構研究が進められています。

CD63 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD63 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD63内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD63の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD63が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。