CD6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403748-ACT

CD6 ist ein T‑Zell-Oberflächenglykoprotein aus der Familie der scavenger receptor cysteine-rich (SRCR), das die Antigenrezeptor-Signalübertragung an der immunologischen Synapse moduliert. Über Interaktionen mit Liganden wie ALCAM (CD166) trägt CD6 zu den Aktivierungsschwellen von T‑Zellen, zu adhäsionsabhängiger Signalgebung und zu nachgeschalteten Signalwegen wie MAPK und NF‑κB bei, die die Zytokinproduktion und die Effektor-Differenzierung prägen. Eine veränderte CD6-Expression oder -Signalübertragung wurde mit fehlregulierten Immunantworten und entzündlicher Pathologie in Verbindung gebracht, was CD6 zu einem geeigneten Ansatzpunkt für die Untersuchung von Immunhomöostase und Leukozytenkommunikation macht. In humanen Systemen bietet CD6 einen gut handhabbaren Zugang, um Kontakt-Dynamiken zwischen T‑Zellen und APCs, die Integration kostimulatorischer Signale sowie Störungen in Immunnetzwerken zu analysieren, die für Autoimmunität und Modelle immunvermittelter Erkrankungen relevant sind.

CD6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.