Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD45RC: sc-400245-ACT

PTPRC code CD45RC, une isoforme de l’antigène leucocytaire commun (CD45), une tyrosine phosphatase de type récepteur qui régule les seuils de signalisation des récepteurs antigéniques dans les cellules hématopoïétiques. En déphosphorylant des kinases clés de la famille Src et en modulant l’activité en aval des voies MAPK, PI3K/AKT et JAK/STAT, CD45RC influence l’activation des lymphocytes T, les réponses aux cytokines et l’homéostasie immunitaire. L’épissage alternatif de PTPRC génère des isoformes de CD45 dotées de domaines extracellulaires distincts, qui orientent la différenciation des lymphocytes et des fonctions spécifiques selon les sous-populations. Une signalisation CD45 dérégulée et un déséquilibre entre isoformes sont pertinents pour l’étude de l’auto-immunité, des mécanismes des maladies inflammatoires et de la biologie des hémopathies malignes, où une signalisation immunitaire altérée contribue à la pathogenèse.

CD45 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTPRC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD45 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTPRC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTPRC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD45. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTPRC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD45 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD45 dans les cellules tumorales présentant une expression de PTPRC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.