CD39 Lentiviral Activation Particles (m): sc-419549-LAC

Entpd1 kodiert die Ectonukleotidase CD39 (ENTPD1), ein Zelloberflächenenzym, das extrazelluläres ATP und ADP zu AMP hydrolysiert und damit die purinerge Signalgebung in vaskulären, immunologischen und stromalen Kompartimenten der Maus prägt. Durch die Regulation der Nukleotidverfügbarkeit beeinflusst CD39 inflammatorische Signale, Thrombozyten- und Endothelreaktionen sowie – im Zusammenspiel mit CD73 – das Gleichgewicht zwischen ATP-getriebenen Gefahrensignalen und adenosinvermittelten immunregulatorischen Signalwegen. Die CD39-Aktivität steht mit der Modulation der Leukozytenaktivierung, der Zytokinproduktion und von Gewebeschädigungsreaktionen in Zusammenhang, wodurch Entpd1 ein relevantes Ziel in Modellen für Entzündung, Thrombose, Ischämie-Reperfusions-Schädigung und tumorassoziierte Immunregulation ist. Seine Expression wird häufig auf regulatorischen T-Zellen, myeloischen Populationen und dem Endothel untersucht, wo der extrazelluläre Nukleotidstoffwechsel die Zell-Zell-Kommunikation steuert.

CD39 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Entpd1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CD39 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Entpd1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CD39-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Entpd1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.