Particules Lentivirales d'Activation (h) CD300E: sc-415572-LAC

CD300E (également connu sous le nom d’IREM-2) code un récepteur de la superfamille des immunoglobulines, exprimé principalement par les cellules de la lignée myéloïde, où il module l’activation de l’immunité innée et la signalisation inflammatoire. L’engagement de CD300E peut se coupler à des voies dépendantes d’adaptateurs favorisant des programmes d’activation cellulaire, notamment la production de cytokines, les réponses phagocytaires et la maturation des cellules présentatrices d’antigène, en interaction avec des processus associés à NF-κB et aux MAPK. Une régulation altérée de la signalisation des récepteurs myéloïdes est pertinente dans les états de dérégulation immunitaire et la biologie des maladies inflammatoires, et les profils d’expression de CD300E sont fréquemment évalués dans des études portant sur l’activation des leucocytes et les microenvironnements immunitaires tissulaires. En tant qu’immunorécepteur de surface, CD300E est également utile pour analyser comment les réseaux de récepteurs activateurs façonnent la polarisation fonctionnelle des macrophages et des cellules dendritiques.

Les particules d'activation lentivirales CD300E (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CD300E dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD300E (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CD300E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD300E. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CD300E ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.