CD229 Double Nickase Plasmid (h): sc-404895-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD229 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD229 Double-Nickase-Plasmid (h) und CD229 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LY9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD229: sc-58992
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD229 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404895-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD229 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404895-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LY9 kodiert CD229 (SLAMF3), einen immunregulatorischen Rezeptor der SLAM-Familie, der überwiegend auf Lymphozyten exprimiert wird. Dort vermittelt er homophile Interaktionen, die Aktivierungsschwellen, Zytokinproduktion und die interzelluläre Kommunikation mitprägen. Über die Assoziation mit Adapterproteinen wie SAP/SH2D1A und nachgeschaltete Signalwege über Src-Familien-Kinasen trägt CD229 zur Modulation von T‑ und B‑Zell-Antworten bei und beeinflusst die Organisation der immunologischen Synapse. Eine veränderte LY9/CD229-Signalübertragung wurde mit Immunfehlregulation in Verbindung gebracht; berichtet wurden Assoziationen mit autoimmunen Phänotypen und der Biologie lymphoider Malignome. Als Oberflächenrezeptor mit kontextabhängig aktivierenden und inhibierenden Effekten wird CD229 häufig in Signalwegen untersucht, die die Lymphozytendifferenzierung, Erschöpfung und die Ko-Signalisierung über Antigenrezeptoren steuern.
CD229 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LY9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LY9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LY9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LY9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.