Plásmido Doble Nickase (h) CD16: sc-400544-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD16 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD16 (h) y el plásmido de doble nickasa CD16 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FCGR3A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD16 Anticuerpo (DJ130c): sc-20052
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CD16 | sc-400544-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD16 | sc-400544-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FCGR3A codifica CD16 (FcγRIIIa), un receptor de baja afinidad para la región Fc de IgG que se expresa de forma destacada en células NK (asesinas naturales), monocitos y macrófagos, donde acopla el reconocimiento de anticuerpos con funciones efectoras celulares. CD16 señaliza a través de las cadenas adaptadoras FcRγ y CD3ζ, que contienen motivos ITAM, para activar quinasas de la familia Src, las vías SYK/ZAP70, el flujo de calcio y, aguas abajo, programas de MAPK y NF-κB que regulan la desgranulación, la liberación de citocinas y la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. La variación genética y la expresión alterada de FCGR3A influyen en el manejo de complejos inmunes y en los puntos de ajuste inflamatorios, vinculando este eje con la autoinmunidad y la disregulación inmunitaria. La biología de CD16 también es central en estudios de activación de la inmunidad innata, polarización de células mieloides y respuestas mediadas por anticuerpos en modelos de oncología y enfermedades infecciosas.
CD16 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FCGR3A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FCGR3A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FCGR3A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FCGR3A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.