CD155 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404597-ACT

PVR (CD155) ist ein nectinähnliches Adhäsionsmolekül der Immunglobulin-Superfamilie, das an der Plasmamembran lokalisiert ist und an Zell-Zell-Interaktionen, Migration und epithelialer Polarität beteiligt ist. CD155 bindet an Immunrezeptoren wie DNAM-1 (CD226), TIGIT und CD96 und verknüpft damit die PVR-Expression mit der Regulation der Aktivität zytotoxischer Lymphozyten und der Immunüberwachung. Funktionell kann PVR die Zytoskelettdynamik sowie Signalnetzwerke modulieren, die mit Adhäsion und Motilität verbunden sind; seine Fehlregulation wird häufig im Kontext von Tumor‑Immun‑Interaktionen, Invasion und metastatischer Progression untersucht. Darüber hinaus dient CD155 als Rezeptor für Polioviren und ist damit relevant für die Forschung zu Mechanismen des Viruseintritts und zu Wirt‑Pathogen‑Interaktionen.

CD155 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PVR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD155 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PVR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PVR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD155-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PVR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD155-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD155-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PVR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.