Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD154 (m): sc-423452
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CD154 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CD154, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD154 Antibody (F-1): sc-374635
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD154 (m) | sc-423452 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Cd40lg code pour CD154 (ligand de CD40), une protéine membranaire de type II principalement exprimée à la surface des lymphocytes T activés, qui se lie à CD40 sur les lymphocytes B, les cellules dendritiques et les macrophages afin de coordonner les réponses immunitaires adaptatives. La signalisation CD154–CD40 déclenche l’activation des voies NF-κB et MAPK, favorise la production de cytokines, soutient la prolifération des lymphocytes B et les réactions des centres germinatifs, et contribue à la commutation isotypique des immunoglobulines. Dans les modèles murins, des altérations de l’activité de Cd40lg influencent la tolérance immunitaire, la présentation de l’antigène et des circuits inflammatoires pertinents pour l’auto-immunité, la biologie des infections et l’immunologie des tumeurs. L’étude de la costimulation dépendante de CD154 est donc essentielle pour analyser le dialogue entre lymphocytes T et CPA (cellules présentatrices d’antigène) ainsi que l’organisation des tissus lymphoïdes.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD154 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd40lg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd40lg, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd40lg à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD154.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd40lg pour l'étude de la signalisation de CD154, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Cd40lg essentiels à la fonction de CD154
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd40lg pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CD154 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CD154 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd40lg. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CD154 plasmide HDR (m) et le CD154 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd40lg pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd40lg définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.