Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD14 (h): sc-400344

Présentation

CD14 est un co‑récepteur de reconnaissance des motifs, ancré à la membrane par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), qui se lie au lipopolysaccharide (LPS) bactérien en association avec la LBP et transfère les ligands vers le complexe TLR4–MD‑2 afin d’initier la signalisation de l’immunité innée. Il agit dans les monocytes, les macrophages et les cellules dendritiques pour amplifier les voies dépendantes de MyD88 et de TRIF, entraînant l’activation de NF‑κB et des IRF, la production de cytokines et l’expression de gènes inflammatoires. Au-delà de la détection des endotoxines, CD14 contribue à la reconnaissance de divers motifs associés aux agents pathogènes (PAMP) et aux dommages (DAMP), et module la phagocytose ainsi que la présentation antigénique. Une signalisation de CD14 dérégulée a été associée à des réponses inflammatoires aberrantes impliquées dans la physiopathologie du sepsis, les troubles inflammatoires chroniques et des phénotypes myéloïdes associés aux tumeurs, pertinents pour la régulation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD14 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CD14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CD14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CD14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CD14 pour l'étude de la signalisation de CD14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CD14 essentiels à la fonction de CD14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CD14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CD14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CD14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD14 plasmide HDR (h) et le CD14 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CD14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CD14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.