Plasmide Double Nickase (m) CD138/SDC1/Syndecan-1: sc-423235-NIC

Sdc1 code pour le syndécane-1 (CD138), un protéoglycane transmembranaire à héparane sulfate qui régule l’adhésion cellule–cellule et cellule–matrice, la présentation des facteurs de croissance et la séquestration des chimiokines à la surface cellulaire. En se liant à des composants de la matrice extracellulaire et à des ligands tels que des membres des familles FGF et VEGF, CD138 module des voies de signalisation, notamment MAPK/ERK, PI3K/AKT, ainsi que la dynamique des adhésions focales dépendantes des intégrines, influençant la prolifération, la migration et l’organisation de la barrière épithéliale. Dans les tissus murins, Sdc1 contribue aux interactions entre cellules immunitaires et à la réparation des plaies en contrôlant les signaux inflammatoires et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une expression dérégulée de CD138 ou son clivage (shedding) est associée à des états d’adhésion et de signalisation altérés, pertinents pour la biologie du cancer, l’inflammation et la recherche sur l’homéostasie tissulaire.

CD138/SDC1/Syndecan-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sdc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sdc1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sdc1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sdc1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.