Plásmido Doble Nickase (h) CD137L: sc-404974-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD137L consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD137L (h) y el plásmido de doble nickasa CD137L (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TNFSF9. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD137L Anticuerpo (G-10): sc-398933
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CD137L | sc-404974-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD137L | sc-404974-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFSF9 codifica CD137L (ligando de 4-1BB), un miembro de la superfamilia del TNF expresado en células presentadoras de antígeno que se une a CD137 (TNFRSF9) en células T y células NK activadas para modular la señalización coestimuladora. Las interacciones CD137L–CD137 favorecen la formación de la sinapsis inmunológica y regulan la producción de citocinas, la proliferación y la supervivencia a través de programas de señalización vinculados a NF-κB y MAPK. Además de la señalización “hacia adelante” en linfocitos CD137-positivos, CD137L también puede transmitir señales “inversas” en células mieloides que influyen en el estado de activación, la diferenciación y la respuesta inflamatoria. La actividad desregulada de TNFSF9/CD137L se ha implicado en inflamación crónica y autoinmunidad, y se estudia con frecuencia en inmunología tumoral, donde el contexto inmunitario y las vías de checkpoint modulan las respuestas dependientes de CD137L.
CD137L El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TNFSF9 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TNFSF9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TNFSF9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TNFSF9 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.