Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD100: sc-405956-ACT

SEMA4D (CD100) est une sémaphorine transmembranaire largement exprimée dans les lignées immunitaires et neuronales, qui signale principalement via les récepteurs de la famille des plexines B ainsi que CD72, afin de coordonner la communication cellule–cellule. CD100 influence le remodelage du cytosquelette, la migration et l’adhérence par l’intermédiaire des voies de signalisation associées aux GTPases de la famille Rho et aux MAPK, modulant ainsi l’activation des lymphocytes, la fonction des cellules dendritiques et les interactions neuro-immunes. Dans le microenvironnement tumoral et les tissus inflammés, les signaux médiés par SEMA4D peuvent moduler l’infiltration immunitaire, les réponses angiogéniques et le remodelage stromal, ce qui en fait un nœud moléculaire utile pour l’étude des voies de signalisation en biologie du cancer, en neuroinflammation et dans des modèles pertinents pour l’auto-immunité. Son expression régulée fournit également un indicateur pour les études du contrôle transcriptionnel et de la dynamique de signalisation récepteur–ligand dans les cellules humaines.

CD100 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SEMA4D sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD100 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SEMA4D dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SEMA4D, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD100. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SEMA4D natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD100 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD100 dans les cellules tumorales présentant une expression de SEMA4D silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.