CCK-AR Double Nickase Plasmid (h): sc-402419-NIC

CCKAR codiert den Cholecystokinin‑A‑Rezeptor (CCK‑AR), einen GPCR der Klasse A, der Cholecystokinin‑Peptide bindet und damit die Verdauungs- sowie die neuroendokrine Physiologie reguliert. Nach Ligandenbindung koppelt CCK‑AR vorwiegend an Gq/11 und aktiviert die Phospholipase Cβ, eine IP3‑vermittelte Ca²⁺‑Mobilisierung, die Proteinkinase‑C‑Signalübertragung sowie nachgeschaltete MAPK/ERK‑Antworten, die Sekretion, Motilität und zelluläre Erregbarkeit steuern. In menschlichen Geweben trägt die CCKAR‑Signalgebung zur Koordination der Gallenblasenkontraktion, der Freisetzung pankreatischer Enzyme und sättigungsbezogener Schaltkreise bei und verknüpft damit Nährstoffsensorik mit hormonellen und neuronalen Signalen. Fehlregulierte GPCR‑Signalwege und eine veränderte CCKAR‑Expression wurden u. a. im Zusammenhang mit metabolischen Phänotypen und funktionellen Veränderungen des Gastrointestinaltrakts untersucht, was seine Relevanz für pathway‑fokussierte Studien zur Krankheitsbiologie unterstreicht.

CCK-AR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CCKAR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CCKAR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CCKAR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CCKAR-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.