Plásmido Doble Nickase (h) CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2: sc-401054-NIC

CNR2 codifica el receptor cannabinoide 2 (CB2), un GPCR acoplado a Gi/o enriquecido en células inmunitarias que modula la señalización de AMPc, la activación de MAPK/ERK y las vías PI3K–AKT aguas abajo de endocannabinoides como 2-AG y la anandamida. La señalización de CB2 regula la migración de leucocitos, la liberación de citocinas, la función de las células presentadoras de antígeno y la homeostasis inmunitaria, lo que lo vincula a la resolución de la inflamación y a las respuestas frente a daño tisular. Se han descrito alteraciones en la actividad y la expresión de CNR2 en diversos trastornos autoinmunes e inflamatorios, neuroinflamación, fibrosis y regulación inmunitaria asociada a tumores, lo que lo convierte en un locus útil para estudios mecanísticos de redes inmunomoduladoras. CB2 también se interrelaciona con la señalización de quimiocinas y de los receptores tipo Toll e influye en estados de polarización celular que moldean las respuestas inmunitarias innata y adaptativa.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CNR2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CNR2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CNR2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CNR2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.