Plasmide CRISPR/Cas9 KO caveolin-2 (m): sc-419480

Présentation

Cav2 code la cavéoline‑2, un composant membranaire intégral des cavéoles qui coopère avec la cavéoline‑1 pour façonner les invaginations de la membrane plasmique et organiser les microdomaines des radeaux lipidiques. La cavéoline‑2 influence l’endocytose et la transcytose, la mécanotransduction et la compartimentation des signaux pour des voies impliquant les récepteurs à activité tyrosine kinase, la signalisation eNOS/NO et le remodelage du cytosquelette. Dans les tissus murins, l’expression de Cav2 est marquée dans les cellules endothéliales, les adipocytes et certains compartiments épithéliaux, où elle contribue au trafic membranaire et à l’homéostasie vasculaire. Des anomalies de la biologie des cavéoles ont été associées à des phénotypes cardiopulmonaires et métaboliques, ainsi qu’à des effets dépendants du contexte sur la migration et la prolifération cellulaires, faisant de Cav2 une cible utile pour étudier l’organisation membranaire dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO caveolin-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cav2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cav2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cav2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine caveolin-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cav2 pour l'étude de la signalisation de caveolin-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cav2 essentiels à la fonction de caveolin-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cav2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le caveolin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le caveolin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cav2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le caveolin-2 plasmide HDR (m) et le caveolin-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cav2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cav2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.