CatSper Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403796

Descripción general

CATSPER1 codifica CatSper, una subunidad de un canal iónico específico de los espermatozoides, necesaria para la entrada de calcio que impulsa la motilidad hiperactivada y favorece la señalización asociada a la capacitación. La actividad del canal CatSper integra cambios en el potencial de membrana y en la dinámica intracelular de Ca2+ para regular los patrones de batido flagelar y los eventos de fosforilación posteriores, esenciales para la fecundación. La alteración de CATSPER1 se asocia con una función espermática deficiente y con fenotipos de infertilidad masculina, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos del control de la motilidad espermática. Como componente de un complejo de canal multisubunidad, CatSper1 también sirve como punto de partida para investigar el ensamblaje, el tráfico intracelular y la regulación de los canales iónicos espermáticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CatSper (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CATSPER1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CATSPER1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CATSPER1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CatSper.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CATSPER1 para la investigación de la señalización de CatSper, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CATSPER1 críticos para la función de CatSper
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CATSPER1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CatSper CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CatSper CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CATSPER1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CatSper (h) y el plásmido HDR CatSper (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CATSPER1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CATSPER1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.