cathepsin S Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419881-ACT

Ctss de camundongo codifica a catepsina S, uma protease cisteína lisossomal que permanece ativa em pH quase neutro e auxilia o processamento de antígenos por meio da degradação da cadeia invariante, facilitando o carregamento de peptídeos no MHC de classe II. Ela contribui para a renovação proteica no endolisossomo, a remodelação da matriz extracelular e a regulação da sinalização inflamatória em células apresentadoras de antígeno, incluindo macrófagos e células dendríticas. A atividade de Ctss se cruza com vias imunes que moldam a ativação da imunidade adaptativa e pode influenciar a remodelação tecidual em microambientes inflamatórios. A expressão ou atividade desregulada da catepsina S tem sido associada a fenótipos autoimunes e inflamatórios e é frequentemente investigada em modelos de neuroinflamação, aterosclerose e imunidade associada a tumores.

cathepsin S O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ctss sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cathepsin S O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ctss em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ctss, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cathepsin S. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ctss nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cathepsin S no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cathepsin S em células tumorais com expressão de Ctss silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.