Plásmido CRISPR de Activación (h) caspase-8: sc-400147-ACT

El CASP8 humano codifica la caspasa-8, una proteasa cisteína iniciadora que acopla la activación de los receptores de muerte a cascadas posteriores de caspasas y a programas regulados de muerte celular. Actúa en el DISC para propagar la apoptosis extrínseca y se vincula al control de la necroptosis mediante interacciones con FADD, cFLIP, RIPK1 y RIPK3, modulando respuestas inflamatorias y al estrés. CASP8 también influye en la señalización inmunitaria y en las decisiones de destino celular aguas abajo de las vías de TNFR y Fas, con efectos dependientes del contexto sobre la producción de citocinas y la supervivencia. La desregulación de la actividad o la expresión de la caspasa-8 se ha asociado con cambios en la sensibilidad a la apoptosis, alteraciones inmunitarias y con la evasión de mecanismos de muerte celular relevantes para el cáncer.

caspase-8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CASP8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

caspase-8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CASP8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CASP8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de caspase-8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CASP8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de caspase-8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía caspase-8 en células tumorales con expresión de CASP8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.