Plásmido Doble Nickase (h) caspase-7: sc-401301-NIC

CASP7 codifica la caspasa-7, una proteasa efectora de cisteína-aspartato que se activa aguas abajo de las caspasas iniciadoras durante la señalización apoptótica intrínseca y extrínseca. Una vez procesada, la caspasa-7 escinde un amplio conjunto de sustratos para promover la condensación de la cromatina, la remodelación del citoesqueleto y el desmantelamiento ordenado de la célula, actuando en conjunto con la caspasa-3. La actividad de CASP7 se interconecta con las respuestas al estrés mitocondrial, las vías de receptores de muerte y contextos inflamatorios en los que la proteólisis apoptótica moldea la homeostasis tisular. La desregulación de la señalización de la caspasa-7 se ha asociado con umbrales alterados de muerte celular observados en la biología del cáncer, la neurodegeneración y patologías relacionadas con el sistema inmunitario, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de apoptosis.

caspase-7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CASP7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CASP7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CASP7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CASP7 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.