Plásmido Doble Nickase (h) caspase-3: sc-400049-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)caspase-3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa caspase-3 (h) y el plásmido de doble nickasa caspase-3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CASP3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: caspase-3 Anticuerpo (E-8): sc-7272
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) caspase-3 | sc-400049-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) caspase-3 | sc-400049-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CASP3 codifica la caspasa-3, una proteasa cisteína-aspartato ejecutora central que escinde cientos de sustratos para impulsar las características bioquímicas y morfológicas de la apoptosis. La caspasa-3 se activa aguas abajo de la señalización mitocondrial intrínseca a través de Apaf-1/caspasa-9 y de las vías extrínsecas mediadas por receptores de muerte a través de la caspasa-8, integrando señales de estrés con el desmantelamiento celular regulado. Mediante la proteólisis de dianas como PARP1, ICAD y componentes del citoesqueleto, la caspasa-3 determina la fragmentación del ADN, la formación de vesiculaciones de la membrana y el compromiso irreversible con la muerte celular programada. La actividad desregulada de CASP3 se ha implicado en diversos contextos patológicos en los que la apoptosis está alterada, como la supervivencia de células cancerosas, la neurodegeneración y fenotipos inmunitarios e inflamatorios.
caspase-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CASP3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CASP3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CASP3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CASP3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.