Plasmide CRISPR d'Activation (m) caspase-1: sc-419461-ACT

Le gène murin Casp1 code la caspase-1, une protéase inflammatoire à cystéine activée en aval des inflammasomes canoniques tels que NLRP3, NLRC4 et AIM2. Une fois activée, la caspase-1 clive la pro–IL-1β et la pro–IL-18 pour générer leurs formes cytokiniques matures, et elle clive également la gasdermine D afin d’initier la mort cellulaire pyroptotique, reliant ainsi la détection des agents pathogènes et des signaux de danger stériles à la réponse inflammatoire. Ces voies façonnent l’immunité innée dans les tissus myéloïdes et les tissus barrières, et sont largement étudiées dans des contextes incluant l’infection, des phénotypes auto-inflammatoires, l’inflammation métabolique et la neuroinflammation. La signalisation de la caspase-1 s’entrecroise avec l’amorçage par NF-κB, les réseaux de cytokines et les programmes de mort cellulaire, faisant de Casp1 un nœud utile pour disséquer, dans des modèles murins, les mécanismes immunométaboliques et de réponse au stress.

caspase-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Casp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

caspase-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Casp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Casp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de caspase-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Casp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de caspase-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie caspase-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Casp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.