Plasmide Double Nickase (h) casein kinase IIα: sc-418515-NIC

CSNK2A1 code la sous-unité alpha catalytique de la caséine kinase II (CK2α), une kinase sérine/thréonine constitutivement active qui phosphoryle une grande diversité de substrats impliqués dans la transduction du signal, le contrôle transcriptionnel et le renouvellement des protéines. CK2α intervient dans des voies régissant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation du stress, et module des processus associés à la chromatine via la phosphorylation de facteurs nucléaires. Une activité dérégulée de CSNK2A1/CK2 a été associée à une altération des signaux de croissance et à des réseaux de phosphorylation aberrants observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment le cancer et les troubles du neurodéveloppement. En tant que nœud central de la phosphorégulation, CK2α est fréquemment étudiée afin de cartographier les circuits dépendants des kinases et de définir des dépendances spécifiques au contexte dans les cellules humaines.

casein kinase IIα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CSNK2A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CSNK2A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CSNK2A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CSNK2A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.