Plásmido CRISPR de Activación (h) casein kinase Iδ: sc-401839-ACT

CSNK1D codifica la caseína quinasa Iδ (CK1δ) humana, una proteína quinasa de serina/treonina que fosforila diversos sustratos para coordinar la temporización del reloj circadiano, la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y el tráfico vesicular. CK1δ contribuye a redes de transducción de señales, incluidas las vías Wnt/β-catenina y Hedgehog, mediante un control dependiente de la fosforilación sobre la estabilidad, la localización y el recambio de sus sustratos. Al modular la fosforilación de proteínas del reloj y de señalización, CSNK1D influye en los ritmos transcripcionales y la proteostasis, procesos que con frecuencia se ven alterados en trastornos proliferativos y neurobiológicos. La actividad desregulada de CK1δ se ha vinculado a fenotipos circadianos modificados y a salidas de señalización aberrantes que convergen con vías asociadas a la oncogénesis y la neurodegeneración.

casein kinase Iδ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CSNK1D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

casein kinase Iδ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CSNK1D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CSNK1D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de casein kinase Iδ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CSNK1D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de casein kinase Iδ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía casein kinase Iδ en células tumorales con expresión de CSNK1D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.