Plasmide Double Nickase (h) Carbonyl reductase 1: sc-402755-NIC

Le gène humain **CBR1** code la **carbonyl réductase 1**, une oxydoréductase cytosolique dépendante du **NADPH** qui catalyse la réduction d’aldéhydes et de cétones réactifs en alcools correspondants. Cette enzyme contribue à l’homéostasie rédox cellulaire et à la détoxification en métabolisant des espèces carbonylées endogènes générées lors du stress oxydatif et de la peroxydation lipidique, ainsi qu’une grande diversité de substrats xénobiotiques. Par ces activités, **CBR1** s’inscrit dans les réponses au stress métabolique et influence la sensibilité des cellules à la charge en composés carbonylés. Des modifications de l’expression ou de l’activité de **CBR1** ont été étudiées dans des contextes d’inflammation, de dérégulation métabolique et de biologie tumorale, où le stress carbonylé et les voies de métabolisme des médicaments peuvent moduler le phénotype.

Carbonyl reductase 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CBR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CBR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CBR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CBR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.