CapZ-α1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405348-ACT

CAPZA1 kodiert CapZ-α1, ein Kappungsprotein für das Plusende (barbed end) von Aktinfilamenten, das mit β‑Untereinheiten zusammenwirkt, um die Dynamik der Aktinpolymerisation, die Filamentstabilität und den Umbau des Zytoskeletts zu regulieren. Durch die Kontrolle der Aktinassemblierung am führenden Rand und in Stressfasern beeinflusst CapZ-α1 Zellform, Adhäsion und Motilität und ist in Signalwege eingebunden, die den Umsatz fokaler Adhäsionen und die Mechanotransduktion steuern. Die Aktivität von CAPZA1 ist zudem mit der sarkomerischen und kontraktilen Aktinorganisation verknüpft und unterstützt Studien zur zytoskelettalen Architektur in differenzierten und proliferativen Zellzuständen. Fehlregulierte Aktinkappung und Remodellierung werden häufig mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für onkogene Invasion, die strukturelle Integrität von Kardiomyozyten und weitere Erkrankungen relevant sind, bei denen veränderte zytoskelettale Mechanik zur Pathologie beiträgt.

CapZ-α1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CAPZA1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CapZ-α1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CAPZA1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CAPZA1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CapZ-α1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CAPZA1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CapZ-α1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CapZ-α1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CAPZA1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.