Plásmido CRISPR de Activación (h) CAMK2A/CaMKII alpha: sc-400228-ACT

CAMK2A codifica la subunidad alfa de la proteína quinasa II dependiente de Ca2+/calmodulina (CaMKIIα), una quinasa de serina/treonina que traduce los transitorios de calcio intracelular en señalización dependiente de fosforilación. En las neuronas, CaMKIIα está altamente enriquecida en las densidades postsinápticas, donde regula el ciclo de las vesículas sinápticas, el tráfico de receptores AMPA y la expresión génica dependiente de la actividad que sustenta la plasticidad sináptica, el aprendizaje y la memoria. CAMK2A integra señales ascendentes provenientes del influjo de Ca2+ mediado por receptores NMDA y converge con programas transcripcionales asociados a MAPK/ERK y CREB. La desregulación de la señalización de CaMKIIα se ha implicado en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, procesos neurodegenerativos y vías de estrés excitotóxico, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de la función neuronal.

CAMK2A/CaMKII alpha El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAMK2A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CAMK2A/CaMKII alpha El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAMK2A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAMK2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CAMK2A/CaMKII alpha. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAMK2A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CAMK2A/CaMKII alpha en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CAMK2A/CaMKII alpha en células tumorales con expresión de CAMK2A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.