calsequestrin 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403375

Panoramica

CASQ1 codifica la calsequestrina 1, una proteina ad alta capacità di legare Ca²⁺ localizzata nel lume del reticolo sarcoplasmatico nel muscolo scheletrico, dove funge da tampone per il Ca²⁺ e contribuisce a modellare l’accoppiamento eccitazione–contrazione. Interagendo con i complessi del recettore della rianodina e con componenti del reticolo sarcoplasmatico giunzionale, CASQ1 sostiene la dinamica di rilascio e ricaptazione del Ca²⁺ che regola la contrattilità, la resistenza alla fatica e l’omeostasi delle fibre muscolari. Alterazioni della gestione del Ca²⁺ dipendente da CASQ1 sono associate a una modificata segnalazione intracellulare del Ca²⁺, a risposte allo stress ossidativo e al rimodellamento dell’architettura del reticolo sarcoplasmatico. Studi genetici e funzionali hanno implicato CASQ1 nella suscettibilità a fenotipi simili all’ipertermia maligna e ad altri disturbi del muscolo scheletrico caratterizzati da un accumulo di Ca²⁺ compromesso e da un rilascio di Ca²⁺ deregolato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO calsequestrin 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CASQ1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CASQ1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CASQ1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina calsequestrin 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CASQ1 per lo studio della segnalazione di calsequestrin 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CASQ1 critici per la funzione di calsequestrin 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CASQ1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal calsequestrin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal calsequestrin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CASQ1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal calsequestrin 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR calsequestrin 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CASQ1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CASQ1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.