Plasmide CRISPR/Cas9 KO calsequestrin 1 (h): sc-403375

Présentation

CASQ1 code la calséquestrine 1, une protéine à forte capacité de liaison au Ca²⁺ localisée dans la lumière du réticulum sarcoplasmique (RS) du muscle squelettique, où elle tamponne le Ca²⁺ et contribue à façonner le couplage excitation–contraction. En interagissant avec les complexes du récepteur à la ryanodine et des composants du RS jonctionnel, CASQ1 soutient la dynamique de libération et de recapture du Ca²⁺ qui gouverne la contractilité, la résistance à la fatigue et l’homéostasie des fibres musculaires. Une perturbation de la gestion du Ca²⁺ dépendante de CASQ1 est associée à une altération de la signalisation intracellulaire du Ca²⁺, des réponses au stress oxydant et un remodelage de l’architecture du RS. Des études génétiques et fonctionnelles ont impliqué CASQ1 dans la susceptibilité à des phénotypes de type hyperthermie maligne et à d’autres troubles du muscle squelettique caractérisés par un stockage de Ca²⁺ déficient et une libération du Ca²⁺ dérégulée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO calsequestrin 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CASQ1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CASQ1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CASQ1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine calsequestrin 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CASQ1 pour l'étude de la signalisation de calsequestrin 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CASQ1 essentiels à la fonction de calsequestrin 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CASQ1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le calsequestrin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le calsequestrin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CASQ1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le calsequestrin 1 plasmide HDR (h) et le calsequestrin 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CASQ1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CASQ1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.