Plasmide CRISPR d'Activation (h) Calretinin: sc-401389-ACT

Le gène humain **CALB2** code la calrétinine, une protéine cytosolique de liaison au calcium de type « EF-hand » qui module le tamponnement intracellulaire du Ca2+ et la transduction des signaux dans les cellules excitables et de type neuroendocrinien. La calrétinine influence la dynamique du calcium dépendante de l’activité, l’excitabilité synaptique et des programmes transcriptionnels en aval qui couplent les flux de calcium aux voies de différenciation neuronale et de survie. En recherche, l’expression de **CALB2** est largement utilisée pour définir des sous-types neuronaux distincts et des lignages d’interneurones, et elle soutient également des études fonctionnelles du comportement des réseaux dépendant du calcium. Une dérégulation de **CALB2** a été rapportée dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment des altérations de la signalisation neurodéveloppementale et des états de lignage associés aux tumeurs, ce qui motive des études mécanistiques des phénotypes de signalisation calcique induits par **CALB2**.

Calretinin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CALB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calretinin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CALB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CALB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calretinin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CALB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calretinin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calretinin dans les cellules tumorales présentant une expression de CALB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.