Calregulin Lentiviral Activation Particles (h): sc-400775-LAC

CALR kodiert Calreticulin, ein im Lumen des endoplasmatischen Retikulums (ER) lokalisiertes Chaperon, das Ca²⁺ bindet und über den Calnexin/Calreticulin-Zyklus die Faltung von Glykoproteinen sowie deren Qualitätskontrolle koordiniert. Calreticulin unterstützt die Proteostase im ER, indem es mit ERp57 und Lektin-Chaperon-Pathways zusammenwirkt, um die Bildung von Disulfidbrücken, den ER-Rückhalt und den Transport neu synthetisierter sekretorischer und membranständiger Proteine zu regulieren. Über das ER hinaus beeinflusst Calreticulin die Ca²⁺-Homöostase, integrinabhängige Adhäsion und Stress-Signalwege im Zusammenhang mit der unfolded protein response (UPR). Veränderte CALR-Aktivität und ER-Stressantworten sind mit fehlregulierter Immun-Signalgebung und onkogenen Phänotypen assoziiert; zudem haben CALR-Mutationen eine etablierte Bedeutung bei myeloproliferativen Neoplasien, was mechanistische Studien zu Konsequenzen für Proteinfaltung und Signalübertragung motiviert.

Calregulin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CALR-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Calregulin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CALR-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Calregulin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CALR-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.