Plasmide CRISPR/Cas9 KO CALML3 (h): sc-400954

Présentation

CALML3 code la calmoduline‑like 3, une protéine de liaison au calcium de type EF‑hand qui agit comme capteur de calcium et module, de manière dépendante du contexte, la signalisation dépendante de la calmoduline. CALML3 est enrichie dans les tissus épithéliaux et a été associée à la régulation de l’organisation du cytosquelette, de la dynamique membranaire et des programmes de différenciation via un contrôle, induit par le calcium, des activités des kinases et des phosphatases. En couplant les flux intracellulaires de Ca²⁺ à des effecteurs en aval, CALML3 peut influencer des processus tels que l’adhésion cellulaire, la motilité et le remodelage lié aux fonctions de barrière. Des profils d’expression altérés de CALML3 ont été rapportés dans la pathobiologie épithéliale et dans des phénotypes associés au cancer, ce qui étaye l’intérêt de son étude dans le reparamétrage des voies de signalisation et les transitions d’état cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CALML3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CALML3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CALML3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CALML3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CALML3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CALML3 pour l'étude de la signalisation de CALML3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CALML3 essentiels à la fonction de CALML3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CALML3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CALML3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CALML3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CALML3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CALML3 plasmide HDR (h) et le CALML3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CALML3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CALML3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.