CALML3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400954

Descripción general

CALML3 codifica la calmodulina tipo 3, una proteína de unión a calcio con motivo EF-hand que actúa como sensor de calcio y modula de manera dependiente del contexto la señalización dependiente de calmodulina. CALML3 está enriquecida en tejidos epiteliales y se ha relacionado con la regulación de la organización del citoesqueleto, la dinámica de membrana y los programas de diferenciación mediante el control, impulsado por el calcio, de la actividad de quinasas y fosfatasas. Al acoplar los flujos intracelulares de Ca²⁺ con efectores aguas abajo, CALML3 puede influir en procesos como la adhesión celular, la motilidad y la remodelación asociada a funciones de barrera. Se han descrito patrones alterados de expresión de CALML3 en la patobiología epitelial y en fenotipos asociados al cáncer, lo que respalda su estudio en el reconfigurado de vías de señalización y las transiciones de estado celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CALML3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CALML3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CALML3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CALML3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CALML3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CALML3 para la investigación de la señalización de CALML3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CALML3 críticos para la función de CALML3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CALML3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CALML3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CALML3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CALML3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CALML3 (h) y el plásmido HDR CALML3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CALML3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CALML3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.