cadherin-16 Double Nickase Plasmid (h): sc-401598-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das cadherin-16 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- cadherin-16 Double-Nickase-Plasmid (h) und cadherin-16 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDH16 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: cadherin-16: sc-393132
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
cadherin-16 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401598-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cadherin-16 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401598-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDH16 kodiert Cadherin-16, ein calciumabhängiges Zell-Zell-Adhäsionsmolekül, das im tubulären Nierenepithel angereichert ist und zur Aufrechterhaltung der Epithelpolarität und der Gewebearchitektur beiträgt. Über homophile Adhäsion und die Kopplung an Catenine beeinflusst Cadherin-16 den Aufbau von Adhärenskontakten, die Organisation des Zytoskeletts sowie Signalprozesse, die mit epithelialer Differenzierung und Barrierefunktion verknüpft sind. Eine veränderte CDH16-Expression ist mit einer gestörten Tubulusintegrität assoziiert und wurde in der renalen Pathophysiologie sowie in der Biologie von Nierentumoren beschrieben, was seine Eignung als Marker und funktioneller Knotenpunkt in der Regulation epithelialer Zustände unterstreicht. Die Untersuchung von Cadherin-16 liefert Einblicke in den Umbau von Zellkontakten, die epitheliale Plastizität und kontextabhängige Veränderungen von Zelladhäsionsprogrammen.
cadherin-16 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDH16-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDH16 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDH16-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDH16-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.