Plasmide CRISPR/Cas9 KO CA V (m): sc-419455
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CA V Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CA V, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CA V Antibody (A-1): sc-398184
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CA V (m) | sc-419455 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Car5a code l’anhydrase carbonique mitochondriale V (CA V), une métalloenzyme au zinc qui catalyse l’hydratation réversible du CO₂ afin de produire du bicarbonate dans la matrice mitochondriale. Cet apport en bicarbonate soutient des réactions anaplérotiques et biosynthétiques en alimentant des enzymes dépendantes de carboxylations, reliant ainsi Car5a à des voies métaboliques telles que la néoglucogenèse, l’uréogenèse, ainsi que le métabolisme des lipides et des acides aminés. Dans les tissus murins à forte demande métabolique, l’activité de la CA V contribue à la régulation du pH mitochondrial et des flux de carbone, influençant ainsi l’équilibre énergétique cellulaire et l’homéostasie des métabolites. Une altération de la fonction des anhydrases carboniques mitochondriales a été associée à des dérégulations métaboliques et peut être étudiée dans le contexte de troubles affectant la gestion de l’azote et le métabolisme intermédiaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CA V (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Car5a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Car5a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Car5a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CA V.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Car5a pour l'étude de la signalisation de CA V, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Car5a essentiels à la fonction de CA V
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Car5a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CA V plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CA V plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Car5a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CA V plasmide HDR (m) et le CA V (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Car5a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Car5a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.