CA II Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401059

Descripción general

La anhidrasa carbónica II (CA II), codificada por el gen humano CA2, es una metaloenzima citosólica de alta actividad que cataliza la hidratación reversible del CO₂ a bicarbonato y protones, regulando así el pH intracelular, el transporte de CO₂ y la disponibilidad de bicarbonato. Mediante su acoplamiento a transportadores de bicarbonato y mecanismos de manejo de protones, la CA II contribuye al mantenimiento de la homeostasis ácido-base en diversos tejidos y participa en procesos como el transporte epitelial de iones, la resorción ósea mediada por osteoclastos y el intercambio gaseoso en eritrocitos. La actividad de CA2 se entrecruza con la regulación metabólica sensible al pH y con las respuestas al estrés celular, donde una función alterada de la anhidrasa carbónica puede influir en la señalización y en la actividad enzimática aguas abajo de la dinámica de protones. Las alteraciones genéticas y funcionales de CA2 se han asociado con trastornos del equilibrio ácido-base y de la mineralización, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la fisiología dependiente del pH y de fenotipos celulares relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CA II (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CA2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CA2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CA2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CA II.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CA2 para la investigación de la señalización de CA II, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CA2 críticos para la función de CA II
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CA2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CA II CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CA II CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CA2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CA II (h) y el plásmido HDR CA II (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CA2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CA2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.