Plásmido CRISPR de Activación (h2) C9orf152: sc-415979-ACT-2

El C9orf152 humano codifica una proteína en gran medida poco caracterizada, con evidencia emergente de funciones en la homeostasis celular y en procesos reguladores, respaldada por patrones de expresión y redes de coexpresión que apuntan a funciones tanto nucleares como citoplasmáticas. Los análisis transcriptómicos sugieren una posible implicación en vías de señalización y de control de la expresión génica vinculadas a la regulación del ciclo celular y a las respuestas al estrés, lo que lo convierte en una diana útil para desentrañar nodos reguladores escasamente anotados. Se han descrito alteraciones en la expresión de C9orf152 en conjuntos de datos asociados a enfermedades, incluidos perfiles relacionados con cáncer, lo que indica relevancia para estudios mecanísticos de programas transcripcionales desregulados y de la adaptación celular. La edición génica de C9orf152 permite la interrogación funcional mediante knockout o el modelado preciso de variantes para cartografiar efectos en vías posteriores, redes de interacción proteica y relaciones fenotipo-genotipo en sistemas celulares humanos.

C9orf152 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C9orf152 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C9orf152 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C9orf152 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C9orf152, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C9orf152. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C9orf152 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C9orf152 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C9orf152 en células tumorales con expresión de C9orf152 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.