C23 (Nucleolin) Double Nickaseプラスミド (h): sc-400191-NIC

NCLはC23（ヌクレオリン）をコードしており、C23は核小体に豊富に存在するRNA結合タンパク質で、rDNAの転写、pre-rRNAのプロセシング、リボ核タンパク質複合体の組み立てを通じてリボソーム生合成を統括します。核小体以外でも、ヌクレオリンはmRNAの安定性、クロマチン構造の制御、DNA損傷応答、核—細胞質間輸送に関与し、細胞増殖やストレス適応を制御する経路と結び付いています。NCLの発現量、局在、または翻訳後修飾の変化は、制御不全の増殖、ゲノム維持機構の障害、翻訳プログラムの変容と関連しており、がんや神経変性などを含む複数の疾患状況で観察されています。多機能な足場タンパク質として、C23は核小体ストレスシグナル伝達やRNA代謝の制御における役割が広く研究されています。

C23 (Nucleolin) ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NCL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NCL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NCLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NCLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。