Plásmido CRISPR de Activación (h) C12orf57: sc-408545-ACT

C12orf57 codifica una pequeña proteína humana poco caracterizada que se ha vinculado con la homeostasis celular fundamental, y cada vez hay más evidencia de que podría participar en el desarrollo neuronal y en procesos de respuesta al estrés. Aunque sus socios moleculares y su ubicación dentro de las vías celulares siguen siendo objeto de estudio, las alteraciones en la dosis de C12orf57 se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y presentaciones clínicas sindrómicas, lo que respalda la necesidad de una regulación génica adecuada en tejidos diferenciados. El control transcripcional de C12orf57 puede entrecruzarse con programas más amplios que gobiernan las decisiones de destino celular, la proteostasis y la dinámica de la señalización intracelular. Estas características hacen de C12orf57 un locus útil para investigar cómo cambios sutiles en la expresión influyen en fenotipos celulares relevantes para la biología neurológica y del desarrollo.

C12orf57 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C12orf57 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C12orf57 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C12orf57 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C12orf57, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C12orf57. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C12orf57 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C12orf57 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C12orf57 en células tumorales con expresión de C12orf57 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.