Plásmido Doble Nickase (h) c-IAP1: sc-417778-NIC

BIRC2 codifica la proteína inhibidora celular de la apoptosis 1 (c-IAP1), una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING que coordina la señalización dependiente de ubiquitina aguas abajo de miembros de la superfamilia de receptores de TNF. c-IAP1 regula las vías canónica y no canónica de NF-κB mediante la ubiquitinación de RIPK1 y la modulación de la estabilidad de NIK, configurando así la señalización inflamatoria, la supervivencia celular y las decisiones de muerte celular programada. También interactúa con puntos de control apoptóticos y necrópticos al influir en la activación de la caspasa-8 y en la dinámica del complejo de señalización inductor de muerte. La expresión o actividad desregulada de BIRC2 se ha vinculado con una resistencia alterada a la apoptosis y con la remodelación de vías inflamatorias en múltiples neoplasias y contextos relacionados con el sistema inmunitario, lo que lo convierte en un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de la señalización TNF/NF-κB.

c-IAP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BIRC2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BIRC2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BIRC2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BIRC2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.