C/EBP beta Double Nickase Plasmid (m): sc-419623-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das C/EBP beta Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- C/EBP beta Double-Nickase-Plasmid (m) und C/EBP beta Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cebpb abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: C/EBP beta: sc-7962
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
C/EBP beta Double Nickase Plasmid (m) | sc-419623-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C/EBP beta Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419623-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Cebpb** kodiert **C/EBP beta**, einen basischen Leucin-Zipper-Transkriptionsfaktor, der induzierbare Genexpressionsprogramme als Reaktion auf entzündliche Signale, metabolischen Stress und Differenzierungssignale koordiniert. C/EBP beta integriert Eingänge aus Zytokin- und Toll-like-Rezeptor-Signalwegen und kooperiert mit Faktoren wie **NF-κB** und **STATs**, um die Festlegung der myeloischen Linie, Akutphasenreaktionen und die Adipogenese zu regulieren. Seine Aktivität beeinflusst Zellzykluskontrolle, Überleben und Gewebeumbau durch transkriptionelle Regulation von Immun- und Stoffwechsel-Genetzwerken. Eine fehlregulierte C/EBP-beta-Signalgebung wird in Säugermodellen häufig im Zusammenhang mit chronischer Entzündung, metabolischer Dysfunktion und onkogenem transkriptionellem Rewiring untersucht.
C/EBP beta Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cebpb-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cebpb abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cebpb-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cebpb-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.