Plásmido Doble Nickase (h) BUBR1: sc-403807-NIC

BUB1B codifica BUBR1, un componente esencial del punto de control del ensamblaje del huso mitótico, que supervisa la unión cinetocoro–microtúbulo y restringe la actividad de APC/C mediante el complejo de control mitótico para evitar el inicio prematuro de la anafase. Al regular la alineación (congresión) cromosómica, la cohesión de las cromátidas hermanas y la progresión de la anafase, BUBR1 ayuda a mantener la estabilidad del genoma y limita la aneuploidía derivada de la segregación errónea de cromosomas. La desregulación de BUB1B/BUBR1 se ha asociado con fenotipos de inestabilidad cromosómica y se ha estudiado en el contexto de trastornos del crecimiento del desarrollo y de defectos del punto de control mitótico relacionados con el cáncer. Como resultado, BUBR1 se utiliza ampliamente como punto de entrada molecular para desentrañar las redes de control mitótico y la señalización del cinetocoro en células humanas.

BUBR1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BUB1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BUB1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BUB1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BUB1B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.