Plasmide CRISPR/Cas9 KO BTN2A2 (m): sc-433634

Présentation

Btn2a2 code la butyrophiline de la sous-famille 2 membre A2 (BTN2A2), une protéine transmembranaire de la superfamille des immunoglobulines qui agit comme régulateur co-inhibiteur des réponses des lymphocytes T. Chez la souris, l’expression de BTN2A2 sur les cellules présentatrices d’antigène module les seuils d’activation des lymphocytes T, favorisant la tolérance périphérique en limitant la prolifération et la production de cytokines. Cette activité de type « checkpoint » place BTN2A2 au sein des voies qui gouvernent la signalisation de la synapse immunologique, la costimulation et le maintien de l’homéostasie immunitaire. Une signalisation BTN2A2 dérégulée a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des réponses inflammatoires altérées pertinentes pour l’auto-immunité, l’infection et les interactions tumeur–système immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BTN2A2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Btn2a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Btn2a2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Btn2a2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BTN2A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Btn2a2 pour l'étude de la signalisation de BTN2A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Btn2a2 essentiels à la fonction de BTN2A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Btn2a2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BTN2A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BTN2A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Btn2a2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BTN2A2 plasmide HDR (m) et le BTN2A2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Btn2a2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Btn2a2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.