Plasmide CRISPR/Cas9 KO BTG1 (h): sc-405339

Présentation

BTG1 (B-cell translocation gene 1) code un régulateur antiprolifératif qui module la progression du cycle cellulaire et la quiescence cellulaire, jouant un rôle majeur dans la différenciation hématopoïétique et l’homéostasie lymphoïde. La protéine BTG1 agit comme corégulateur transcriptionnel et s’interface avec la machinerie de déadénylation des ARNm (complexe CCR4–NOT) via des interactions avec des facteurs tels que CAF1/CNOT7, influençant ainsi la stabilité des transcrits et les programmes d’expression génique. Par ces activités, BTG1 affecte des sorties de signalisation liées aux réponses au stress et aux points de contrôle du développement, notamment des voies régissant la prolifération, l’apoptose et la différenciation. Une expression altérée de BTG1 ou des lésions génétiques le touchant sont fréquemment associées à la biologie des hémopathies malignes lymphoïdes et aux phénotypes de réponse aux traitements, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des processus de type suppresseur de tumeur et du contrôle transcriptionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BTG1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BTG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BTG1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BTG1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BTG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BTG1 pour l'étude de la signalisation de BTG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BTG1 essentiels à la fonction de BTG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BTG1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BTG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BTG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BTG1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BTG1 plasmide HDR (h) et le BTG1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BTG1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BTG1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.