Plasmide CRISPR d'Activation (h) BTG1: sc-405339-ACT

BTG1 (B-cell translocation gene 1) code un régulateur antiprolifératif qui module la progression du cycle cellulaire et la différenciation cellulaire, jouant un rôle important dans le contrôle de programmes transcriptionnels liés à la croissance. BTG1 interagit avec des machineries transcriptionnelles et post‑transcriptionnelles, notamment les complexes de déadénylation CCR4–NOT, ce qui l’associe au renouvellement des ARNm et à l’ajustement fin de l’expression génique. Dans les contextes immunitaires et hématopoïétiques, BTG1 contribue au contrôle homéostatique de l’expansion des cellules lymphoïdes et aux voies de signalisation induites par le stress. Une expression altérée de BTG1 ou la perturbation de son réseau régulateur est fréquemment étudiée en lien avec des processus oncogéniques, en particulier dans la biologie des hémopathies malignes à cellules B et les dérégulations transcriptionnelles associées.

BTG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BTG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BTG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BTG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BTG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BTG1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BTG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BTG1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BTG1 dans les cellules tumorales présentant une expression de BTG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.